PBJ | 康奈尔研究人员通过在大豆中引入barnase/barstar建立可恢复雄性不育系统并应用于大豆杂交育种

大豆是世界上最具经济和社会影响力的作物之一,在全球范围内为动物提供蛋白质并且占据极大的比重,同时在石油生产、制造和生物燃料应用中发挥关键作用。据2022年统计,美国种植了3490万公顷大豆,是仅次于玉米的第二大种植作物。鉴于大豆对全球农业的重要性,大豆品种的改良可以产生变革性影响,可以使农民在现有土地上基础生产更高的产量来促进可持续农业。

近日,美国康奈尔研究人员在Plant Biotechnology Journal在线发表了“Introduction of barnase/barstar in soybean produces a rescuable male sterility system for hybrid breeding”。通过将大豆花药中特异性表达的启动子表达细胞毒性核糖核酸酶barnase能够完全阻止花粉成熟,从而产生雄性不育材料。其F1代与表达barnase抑制剂的barstar材料花粉杂交时,可恢复其生育能力。这项工作证明了基于barnase/barstar的雄性不育/恢复系统可用于生产大豆杂交种并产生可育的杂交后代。

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杂交优势是指后代表现优于父母的现象,一个多世纪以来一直用于提高作物产量、提高非生物和生物胁迫耐受性并提高种子的营养质量的重要手段。通过费力的手工杂交技术制成的大豆杂交种相对于近亲亲本的产量可以提高10%-20%。但由于生产大豆杂交种具有挑战性,这些试验仅限于少数基因型组合,因此通过优势提高产量的潜力远未耗尽。为了获得杂交育种的好处,高产和市售杂交大豆种子的生产必须高效、低廉,并与现有农业实践兼容。

常用的的一种方法是使用雄性不育(male sterility MS)阻止自交。核雄性不育 (nuclear male sterility NMS)、细胞质雄性不育 (cytoplasmic male sterility CMS) 和光周期/温度敏感基因雄性不育系统与生育恢复基因的结合在大豆杂交种的小规模试验中产生了有希望的结果。然而,这些系统存在多种缺点,使其几乎不适用于商业杂交大豆育种应用。例如,三系育种系统需要维持系,导致近亲繁殖CMS系的遗传多样性低,并且在光周期/温度敏感的雄性不育系统的情况下需要限制性生长条件。最重要的是,这些雄性不育系中在阻止自交方面并非100%有效,并且往往无法在F1世代中表现出对生育能力的完全恢复,这使得这些现有的杂交育种解决方案在商业上不可行。

NMS和CMS的替代方案是barnase和barstar的组合,即一种双组分系统,其中通过在不同材料中的绒毡层特异性表达细胞毒性核糖核酸酶Barnase和其抑制剂Barstar。TA29启动子常被选择用于诱导雄性不育。TA29驱动的barnase在绒毡层中的靶向表达破坏了该细胞层,导致雄性花粉不育。通过将表达barnase的植物与携带核糖核酸酶抑制剂barstar的绒毡层特异性表达的转基因的花粉杂交,其后代恢复生育能力。这种方法已被用于为多种作物中并创建杂交育种系统。

为鉴定不同启动子对核糖核酸酶抑制剂barstar启动效率对大豆生育恢复的影响,研究人员比较了GmTA29a和GmTA29b启动子,如图1所示。GmTA29b启动的barnase即可实现雄性不育,如图2所示。

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图1

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图2

为了测试表达barnase的心皮是否接受花粉,研究人员将WT和GmTA29a::BARSTAR花粉杂交到GmTA29b::BARNASE柱头上,并使用苯胺蓝染色来跟踪花粉管伸长率。相对于WT对照,研究人员发现GmTA29b::BARNASE心皮上的花粉粒萌发和生长未改变,共聚焦图像显示花粉粒能够粘附在柱头表面,无论花粉和心皮基因型如何,在授粉后24小时观察到相当水平的花粉管生长。这些数据表明GmTA29b::BARNASE心皮具有生殖活力。研究人员将构建了的两个barstar系来测试相对于barnase更高剂量的barstar是否足以完全挽救F1杂交种的雄性生育能力。将GmTA29a::BARSTAR和GmTA29b::BARSTAR材料杂交到GmTA29b::BARNASE材料上发现,两种转基因的存在都不会影响整体营养生长和形态,但在生殖发育阶段,所有GmTA29b::BARNASE×GmTA29b::BARSTAR F1花都是闭合的,而GmTA29b::BARNASE×GmTA29a::BARSTAR F1材料都发育出裂头状花和裂缝花,类似于WT植物如图3所示。

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图3

因GmTA29a表现出比GmTA29b更高的表达效率,结果显示barstar更高的表达对育性的恢复具有重要意义,如图4和图5所示。

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图4

综上所述,研究人员发现雄性生育能力的成功挽救取决于barnase和barstar的相对剂量。当barnase和barstar在同一特异性启动子下表达时,F1后代保持雄性不育。当在比Barnase相对强的启动子下表达barstar时,能够在F1一代中成功挽救雄性生育能力。

文章来源:植物生物技术Pbj

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